LNP Calculator
根据脂质配方快速计算实验体系。第一步:选择脂质配方并配置 Lipid Mix;第二步:输入制备参数(脂相浓度、FRR、N/P 比、RNA 用量),自动计算水相和脂相各组分体积。
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配置脂质混合物2
定义制备参数第一步:选择 LNP 配方,配置脂质混合物
选择各脂质组分(支持 2–5+ 种),设置摩尔比和母液浓度,输入目标 Lipid Mix 体积后自动计算吸取量。
Cationic / Ionizable
--
Helper (Structural)
--
Sterol
--
PEG-Lipid
--
摩尔比总和(4 种组分):100.0%
Lipid Mix 总浓度:31.96 mM(19.84 mg/mL)
我的配方
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第二步:定义 LNP 制备参数
设置脂相浓度、流速比 (FRR)、N/P 比和 RNA 用量,自动计算水相和脂相各组分体积。
制备参数
:
RNA 用量与体系体积
水相 Aqueous
RNA volume--
Citrate buffer--
Total--
脂相 Organic
Lipid mix--
Ethanol--
Total--
我的实验参数
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新手入门: LNP 制备流程
LNP 的制备通常采用手动制备(涡旋或吹打)或微流控混合法, 将溶解在乙醇中的脂质混合物与含 RNA 的水相快速混合, 自组装形成包裹核酸的纳米颗粒。
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配制 Lipid Mix(脂相)
- 按摩尔比混合各脂质 stock solution
- 典型配方:阳离子脂质 + 辅助脂质 + 胆固醇 + PEG 脂质
- 溶剂:无水乙醇
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配制水相 (Aqueous)
- RNA 溶于 pH 4.0 柠檬酸缓冲液
- N/P 比决定 RNA 与阳离子脂质的摩尔比
- FRR(流速比)决定水相 : 脂相体积比
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快速混合
- 微流控混合、手工移液混合或涡旋混合
- 乙醇稀释使脂质自组装为纳米颗粒
- RNA 被包裹进 LNP 核心
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后处理与表征
- 透析或超滤除去乙醇,换为 PBS
- 测量粒径 (DLS)、Zeta 电位
- 测定包封率 (EE%) 、总RNA浓度和 RNA 完整性等
N/P 比
阳离子脂质的可电离胺基 (N) 与核酸磷酸基 (P) 的摩尔比。典型范围 4–10,常用 6。建议配置高浓度的lipid mix混合液, 可短期 -20°C 储存。
FRR (Flow Rate Ratio)
水相与脂相的体积/流速比。经典 LNP 配方一般为 3:1(水相:脂相)。小试微流控的流速一般为10-20 ml/min, 需要根据芯片类型进行优化。
脂相浓度
脂质在有机相中的总摩尔浓度 (mM),由 Lipid Mix 浓度稀释至目标浓度。 一般 4–20 mM。浓度会影响包封效率和粒径,一般高浓度具备高效率、大粒径,低浓度具有低效率、小粒径,浓度对手包的影响大于微流控。粒径显著影响 LNP 体内靶向性,需要慎重考量。